DESCRIPTION:

Afullyvalidated,highlyspecific,affinitypurifiedrabbitpolyclonalantibodytoGFP,EGFP,PA-GFP,CFPandYFP

Background:Thegreenfluorescentprotein(GFP)iscomposedof238aminoacidresidues(26.9kDa)andexhibitsbrightgreenfluorescencewhenexposedtoultravioletbluelight.IthasbecomeawellestablishedreporterforgeneexpressionandMarkerforproteintargeting.SubtlemodificationshavebeenmadetothesequenceofGFPimprovingitssolubilityandphotostablility(eGFP)toallowacquisitionofmorecomplexdata(FRET,FRAP).Moreover,subtleresiduemodificationshavebeenengineeredtoaltertheemissionwavelengthsuchasinCFP,YFPtofacilitateduellabelling.Anti-GFPAbisapolyclonalantibodyraisedinrabbitbyimmunisationwith,andaffinitypurificationagainstfulllengthGFP(Faixetal.,2001).ItproducesexceptionalstainingforGFP,PA-GFP,EGFP,CFPandYFPinwesternblottingatadilutionof1:10,000andbioimagingapplicationsathighdilutions,ithasfeaturedinanimpressivenumberofpublications.

TestedApplications:Westernblot(1:10,000dilution),IFMicroscopy(1:500-5000dilution).

DATASHEET:

Description	LyophilisedeabbitpolyclonalmonoclonalantibodytoGFP
Immunogen	RecombinantGFPtogetherwithcompleteFreund"sadjuvant
Isotype	IgG
Purification	AffinityPurifiedusingpurifiedGFPcovalentlycoupledtocyanogenbromideactivatedagarose
Speciesreactivity	No
Testedapplications	WB,IF,IP,ELISA
Recommendeddilution	WB1:10,000,IF1:500-5000,IP,ELISA
Optimization	Optimaldilutionstobedeterminedbyenduser
Storage	Lyophilisedantibodyisstableat4°Cwhenstoredwithdesiccant.Reconstitutelyophilisedpowderin6.25µlof18MΩH2O,aliquotandstorefrozenat-80°Cfor1year.Avoidfreeze-thawcycles.
Storage	Lyophilised:4°C.Reconstituted:-80°C
Datasheet	A010-pGFP-5
MSDS	A010-pGFP-5
Regulatorystatement	Productforresearchuseonly.Notintendedfordiagnosticortherapeuticuse.

Badrilla免疫测定校准的专有技术

Badrilla开发了一种用于免疫分析校准的专有技术，该技术将普通的免疫分析平台（Western blotting）升级为强大的定量平台。

数量有限的应用程序中提供了定量免疫测定（某些ELISA测定），但大多数免疫测定形式（Western印迹，免疫显微镜）都没有这种定量免疫测定。研究者希望尽可能地以绝对化学单位准确，可重复地测量生物标志物。为了促进这一点，Badrilla创建了专有的校准标准技术，该技术将Western印迹升级为能够检测绝对化学单位（pmol /样本或类似单位）中生物标志物浓度的定量免疫测定法。这为快速发展感兴趣的生物标志物的简单定量测定提供了一条途径。

这项技术如何运作？

高质量的校准标准品通过共价连接到支架上定义的反应位点（本身是重组蛋白：b），或通过制造支架本身的延伸来将特定免疫测定的表位特征整合到重组产品中。这些制造方法允许根据需要并入从简单的肽和磷酸肽到蛋白质结构域的各种复杂性的表位。

可以快速生成所研究的生物标志物特有的校准标准。可以以允许构建校准曲线的浓度范围将此类校准标准品掺入测定中。这可以用于高精度和高精度地确定生物标志物的绝对浓度。

在测试系统中，进行了两次His6-表位校正标准品的蛋白质印迹。观察到一个55kDa的条带，信号强度随校准物的加载量（4pmol – 0.125pmol）而变化。

原始数据的光密度测定法可以构建校准曲线，该曲线很容易通过以极高的精度一式三份地检查的三个校准物浓度来定义。使用校准曲线，可以计算平行检查的生物标志物的浓度。观察到的绝对浓度变化小于10％。

哪些生物标志物可以校准？

该技术非常适合：

• 线性肽表位

• 翻译后修饰位点（磷酸化，糖基化等）

• 半抗原（染料，药物，代谢物）

• 蛋白质结构域

• 单个或多个表位，和

• 以上的组合

通过合作发展

Badrilla与利兹大学，利物浦大学和牛津大学的杰出学术团体合作进行了一项研发计划。我们富有成效的协作方法使我们能够：

• 定量质谱的基准定量蛋白质印迹技术

• 将定量蛋白质印迹与高通量蛋白质印迹相结合，以实现更高的分析通量

• 探索新的制造技术（用于校准标准）以扩展该技术的多功能性。